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    利用血管緊張素I提取比較傳統的SPE柱與磁性萃取劑的性能

    檢測樣品:血管緊張素I檢測項目:固相萃取

    方案概述:血管緊張素!(Ang I)是較為常見的臨檢標志物之一,通過對血管緊張素提取效果的漢試,能夠有效地評價各種樣品前處理手段的臨床適用性和技術性能。本文通過對比市售的某著名進口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取劑提取Ang I試驗的各項方法學指標,直觀地比較了兩者的性能表現。也為臨床SPE樣品前處理技術的發展前景提供了非常有價值的參考。

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    更新時間2022年05月11日

    上傳企業普敦科技

    下載方案

    利用血管緊張素I的提取比較傳統SPE柱與磁性萃取劑的性能

    關鍵詞

    血管緊張素I,液相色譜質譜,固相萃取,Angiotensin I,Ang I,Renin,LC-MS/MS,SPE

    前言

    血管緊張素IAng I)是較為常見的臨檢標志物之一,通過對血管緊張素I提取效果的測試,能夠有效地評價各種樣品前處理手段的臨床適用性和技術性能。

    本文通過對比市售的某有名的進口品牌HLB 96SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取劑提取Ang I試驗的各項方法學指標,直觀地比較了兩者的性能表現。也為臨床SPE樣品前處理技術的發展前景提供了非常有價值的參考。

    實驗設計

    如下表所示,使用1% BSA制備四個濃度水平的Ang I系列標準溶液,輔以穩定同位素標記的Ang I內標。

    Ang I

    濃度(ng

    內標濃度(ng

    LOQ

    0.5

    10

    低水平(L

    7.5

    10

    中水平(M

    30

    10

    高水平(H

    80

    10

    設定如下條件的SPE,應用于某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板。使用適配的正壓96SPE操作裝置運行樣品。

    名稱

    操作

    活化

    使用500 μL甲醇活化SPE板兩次

    平衡

    使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板兩次

    上樣

    500 μL LOQ、低(L)、中(M)、高(H)上樣

    淋洗1

    使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板兩次

    淋洗2

    使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板兩次

    洗脫

    每孔各加入250 μL甲醇,收集洗脫液于96孔板中

     

                                                                                     2.png

    與此對應的,為AUTO M32全自動萃取儀設定如下的程序運行樣品,每個樣品使用2mg HLB磁性萃取劑。

    指令

    溶液

    孔位

    溶劑量(μL

    活化

    甲醇

    1

    500

    平衡

    5%甲酸水溶液

    2

    500

    上樣

    樣品溶液

    3

    500

    淋洗1

    5%甲酸水溶液

    4

    500

    淋洗2

    20%甲醇水溶液

    5

    500

    洗脫

    甲醇

    6

    250

    排廢

    /

    2

    600

     

    3.png

     

    數據和比較

    將實驗設計中所述的四個標準樣本,每個樣品重復三次提取,比較兩種前處理方法提取后,在LC-MS/MS上測得的相對標準偏差,結果如下圖所示。其中,左側藍色柱為使用某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板提取后的測定結果,右側橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結果。

     

    4.png

     

     

    5.png

     

     

    b,低水平(L)重現性

     

    6.png

     

     

    7.png

     

       

    可以看到,兩種前處理方法無論在外表峰面積、內標峰面積、計算濃度上的相對標準偏差均沒有顯著的差別,但是磁性萃取劑的結果在大多數水平下都略好于傳統的96SPE多孔板。

    在提取率的比較中,我們選擇某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板提取后測得的峰面積為基準(100%),以磁性萃取劑提取后測得的峰面積與之比較。如下圖所示,左側藍色柱為使用某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板提取后的測定結果,右側橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結果。

    8.png


    最后如下圖展示的LOQ水平兩種方法提取后,在LC-MS/MS所得的MRM色譜圖。圖a為使用傳統的96位SPE多孔板所得色譜圖,圖b為磁性萃取劑所得色譜圖??梢钥吹?,在所有濃度水平下,磁性萃取劑提取測得峰面積均顯著地好于傳統的96SPE多孔板,且均超過后者50%以上,最高甚至達到了約1.8倍。

     

    9.png

    結果討論
    明顯地,在LOQ水平下,磁性萃取劑提取得到的色譜峰高超過了傳統的96SPE多孔板提取,這與提取率結果是完全一致的。

    通過上述數據比較,我們可以得到如下表所述的結果。
     

     

    絕對重復性

    相對重復性

    提取率

    LOQ質量

    操作模式

    某著名進口品牌96SPE多孔板

    較佳

    較佳

    適中

    適中

    手動+負壓裝置

    磁性萃取劑

    較佳

    較佳

    50%以上

    較佳

    少量手動+自動設備


    均優于某著名進口品牌的HLB 96SPE多孔板。同時,AUTO M32全自動提取儀固有的“一次移液”和“無人值守”操作模式,降低了樣品前處理中的人為參與,同時大幅提高了自動化水平。

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